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固氮菌肥料行業標準 
(發布日期:2007-5-23 10:24:02)
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    標準類別:NY-行業標準(農業)

  關鍵詞:固氮菌肥料

  標準號:NY411—2000

  標準名稱:固氮菌肥料*

  標準分類:農業土壤化肥標準

  頒布部門:

  頒布日期:

  實施日期:

  ========================================================

  1范圍

  本標準規定了固氮菌肥料產品的分類、技術要求、檢驗方法、檢驗規則、包裝、標識、運輸、貯存等。

  本標準適用于含有益的固氮菌、能在土壤和多種作物根際中固定空氣中的氮氣,供作物氮素營養,又能分泌激素刺激作物生長的活體制品。本標準也適用于以固氮菌為主的含有能促進固氮、生長的植物促生根際細菌(PGPR)的復合固氮菌肥料。

  2引用標準

  下列標準所包含的條文,通過在本標準中引用而構成為本標準的條文。本標準出版時,所示版本均為有效。所有標準都會被修訂,使用本標準的各方應探討使用下列標準最新版本的可能性。

  GB/T625—1989化學試劑硫酸

  GB/T629—1997化學試劑氫氧化鈉

  GB/T1250—1989極限數值的表示方法和判定方法

  GB/T6543—1986瓦楞紙箱

  GB/T6682—1992分析實驗室用水規格和試驗方法

  3定義

  本標準采用下列定義。

  31自生固氮菌

  在土壤里能固定空氣中的氮,供作物氮素營養,又能分泌激素刺激作物生長的微生物。

  32根際聯合固氮菌

  既依賴根際環境生長,又在根際中固定空氣中的氮氣,對作物的生長發育產生積極作用的微生物。

  33固氮效能

  固氮菌每消耗1g碳水化合物(糖)從空氣中攝取氮素的毫克數,固氮效能用mg氮/g糖表示。

  4產品分類

  41按劑型不同分為液體固氮菌肥料、固體固氮菌肥料和凍干固氮菌肥料。

  42按菌種及特性分為自生固氮菌肥料、根際聯合固氮菌肥料、復合固氮菌肥料。

  5技術要求

  51菌種

  在含一種有機碳源的無氮培養基中能固定分子氮,并具有一定的固氮效能。菌體一般為短桿狀(固氮螺菌屬菌體呈螺旋狀),革蘭氏染色陰性。

  511自生固氮菌

  用固氮菌屬(Azotobacter)、氮單胞菌屬(Azomonas)的菌種,也可用莖瘤根瘤菌(Azorhizobiumcaulinodans)和固氮芽胞桿菌(Paenibacillusazotofixans)菌株。

  512根際聯合固氮菌

  可用下列菌種固氮螺旋菌(Azospirillum);陰溝腸桿菌(Enterobactercloacae)經鑒定為非致病菌的菌株;糞產堿菌(Alcaligenesfaecalis)經鑒定為非致病菌的菌株;肺炎克氏桿菌(Klebsiellapneumoniae)經鑒定為非致病菌的菌株。

  使用本準則規定之外的菌種生產固氮菌肥料時,菌種必須經過鑒定,并符合51要求。

  生產固氮微生物肥料所使用的菌種,必要時還要進行菌種染色鑒別(見附錄B)和菌種固氮效能測定(見附錄C)。

  52成品技術指標(見表1)

  表1成品技術指標

  指標劑型:液體固體凍干

  項目:乳白或淡褐色液體,黑褐色或褐色粉狀,

  外觀、氣味混濁,稍有沉淀,無濕潤、松散,無異臭乳白色結晶,無味

  異臭味味

  水分,%—250!35030

  pH值55!7060!7560!75

  細度,過孔徑018mm標準篩5200

  的篩余物,%#

  有效活菌數,個/mL(個/g、個/501081010850108瓶)$

  雜菌率1),%$5015020

  有效期,2),月#3612

  1)其中包括10-6馬丁培養基平板上無霉菌。

  2)此項僅在監督部門或仲裁檢驗雙方認為有必要時才檢測。

  6抽樣

  按每一發酵罐菌液制成的產品為一批,逐批抽樣檢驗。抽樣過程要嚴格避免雜菌污染。

  61抽樣工具及用品

  抽樣前預先準備好無菌塑料袋(或塑料瓶)、金屬勺、剪刀、封口機、牛皮紙封樣袋、標簽、抽樣封條和膠水。

  62抽樣數量及抽樣方法

  在成品庫抽樣,可按''形分層設點抽取,抽樣以件為單位,小包裝產品以一包裝箱為一件。大包裝(30!50kg)產品以一袋(或一桶)為一件。抽樣件數由樣品基數的大小確定。1!10件,全部抽樣;11!200件,抽樣10件;201!400件,抽取20件;樣品基數大于

  400件者,按超過部分的2%增加抽樣件數,但總件數不要超過40件。

  每件包裝產品抽取一小袋,在無菌條件下每袋取樣200g。然后將所有樣品混勻,按四分法縮到2000g,分裝4袋,然后封口。每2袋為一份裝入牛皮紙封樣袋。

  液體產品每件吸取10mL,一同放入無菌的三角瓶中,混勻后分成兩份,每份250mL。凍干產品,每件取一支放入無菌的三角瓶中,加無菌液體培養液,溶解混勻后分成兩份,每

  份50mL。貼上標簽和封條(一份被抽樣單位留存,一份交檢測中心檢測)。

  7檢驗方法

  71儀器設備及試劑

  711儀器設備

  生物顯微鏡(10100);菌落計數器;恒溫培養箱;恒溫干燥箱,恒溫搖床;滅菌鍋;無菌室或超凈工作臺;酸度計;試管%15mm150mm,%18mm180mm;培養皿直徑9cm; 三角瓶500mL;無菌吸管05、1、5、10mL;玻璃刮刀;濾紙;酒精燈;標準篩孔徑018mm和015mm;1號羊毛畫筆;無菌水;無離子水。712試劑選擇培養基(見附錄A);剛果紅染液(05%)。

  72成品檢驗

  721氣味檢驗

  取固氮菌肥料樣品打開包裝,進行感觀檢驗。

  722外觀檢驗

  將固體固氮菌肥料包裝打開,裝在白色搪瓷盤中,將液體固氮菌肥料搖勻,在明亮光線下進行感觀檢驗。

  723pH值測定

  液體固氮菌肥料的pH值測定:取供檢菌液直接測定pH值,取三次測定結果的平均數。固體固氮菌肥料的pH值測定:取50mL燒杯一個,加入菌肥25g,無離子水25mL。通過磁力攪拌器使溶液均勻后用酸度計測定pH值。取三次測定結果的平均數。

  724含水量測定

  稱取固體固氮菌肥三份,每份2000g,精確到001g,放入已稱恒重的鋁盒中。置105干燥箱內烘烤4h,移至干燥器內,冷卻后稱重。根據烘干前后質量差按式(1)計算含水量。取三個樣品測定數的平均值。平行樣品絕對偏差應低于1%。

含水量(m

  %)=0-m1

  m100…………………………(1)

  0

  式中m0———烘干前樣品質量,g;

  m1———烘干后樣品質量,g。

  725吸附劑顆粒細度測定

  稱樣1000g

  (精確至001g),置于標準篩中(直徑分別為018mm或015mm),用水沖洗,用毛筆輕刷,至粉末不再通過為止。將篩余物置105!110溫度下烘干,稱重。篩余物百分含量按式(2)計算:

  篩余物(%)=篩余物量(1-樣品含水量百分數)

  樣品質量100…………(2)

  726有效活菌數和雜菌含量測定

  采用平板計數法測定有效活菌數及雜菌率。

  7261測定步驟

  采樣應不少于500g,從中稱取1000g,加入帶玻璃珠的100mL的無菌水中(液體菌劑取10mL,加入90mL的無菌水中),靜置20min后在旋轉式搖床上200r/min充分振蕩

  30min,即成母液的菌懸液。

  用無菌吸管吸取5mL上述母液的菌懸液加入45mL無菌水中,混勻成110稀釋的菌懸液,這樣依次稀釋,分別得到11102,11103,11104,11105等濃度(每個稀釋度必須更換無菌吸管)。

  用05mL無菌吸管分別吸取不同稀釋度菌懸液01mL,加至直徑為9cm平皿的選擇培養基(見附錄A)表面,用無菌玻璃刮刀將菌懸液均勻地涂于瓊脂表面,或取1mL不同稀釋度菌懸液加入培養皿內,與瓊脂培養基混勻,每個樣品取3個連續適宜稀釋度,每一稀釋度重復3次,同時加無菌水的空白對照。28培養2!3d后每個稀釋度取5!10個菌落的菌體,涂片染色(見附錄B)。顯微鏡觀察識別后,選一個適宜稀釋度(菌落在30!300個之間的平板),計算出同一稀釋度三個平皿上菌落平均數。

  雜菌數是指在選擇培養基上,除有效活菌外的其他菌的菌落數與馬丁培養基上霉菌數之和。馬丁培養基10-4稀釋度菌懸液加樣,操作步驟同樣品有效活菌數檢測操作。

  7262允許差

  平行樣品誤差按式(3)計算,并應符合表2的規定。

  *=%(x--x)

  (n-1…………………………………(3)

  式中*———單一標準差;

  x———同一個稀釋度任一個平板測定值;

  -x———同一個稀釋度平板測定的平均值;

  n———重復次數。

  表2平板上菌落數對應的單—標準差

  平板上菌落數,個/皿30!5051!99100!300

  單一標準差,100200500

  7263測定結果的計算

  按式(4)、式(5)計算樣品的有效活菌數及雜菌率

  有效活菌數(個/g)=菌落平均數稀釋倍數母液菌懸液的體積(mL)

  菌劑克數或毫升數

  1

  加樣量(mL)……………………………………………………………………………(4)

  雜菌率(%)=雜菌數

  有效菌數+雜菌數100……………………(5)

  727有效期檢驗在產品說明書標明的有效期到達前10d測定擾品各項指標,方法同721!726。

  8檢驗規則

  81檢驗分類

  811產品出廠檢驗

  產品交貨時進行的檢驗。

  812產品型式檢驗

  新產品鑒定或

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